服务热线
86-
01. 研究背景
(1) 研究问题：这篇文章主要探讨了使用MaxCyte流式电穿孔技术进行病毒载体（包括腺相关病毒和慢病毒）生产的方法和效率。
(2) 研究难点：传统的病毒载体生产技术劳动密集、步骤多且效率低，难以满足大规模生产的需求。
(3) 相关工作：MaxCyte的流式电穿孔技术作为一种通用的瞬时转染平台，旨在解决病毒载体生产的诸多问题。
02. 研究方法
提出了使用MaxCyte流式电穿孔技术进行病毒载体生产的方法。具体来说包括：
(1) 细胞类型：该技术适用于贴壁细胞和悬浮细胞。
(2) 多质粒共转染：MaxCyte系统可以同时转染多个质粒，包括大质粒，从而制造复杂的病毒载体。
(3) 可扩展性：MaxCyte系统在不同规模的细胞培养中表现出一致的高转染效率和细胞活力。
03. 实验设计
(1) 大规模慢病毒生产：在贴壁HEK细胞中使用MaxCyte STX进行四质粒共转染。
• HEK 293FT细胞在转染前2-3天在10层细胞工厂中接种。
• 使用流式电穿孔技术进行共转染，每天收集培养基并测量转导单位。
(2) 悬浮细胞中的慢病毒生产：悬浮适应的HEK 293FT细胞在10L Wave Cellbags中培养，通过流式电穿孔技术转染慢病毒组件质粒。
• 转染后的细胞被返回Cellbags中。
• 在GMP合规的核心设施中进行3次生产运行，每次运行均显示出高滴度。
(3) 不同规模下的慢病毒生产一致性：通过静态电穿孔和流式电穿孔（使用MaxCyte）。
• 测量转染后48小时的慢病毒滴度，结果显示无论规模大小，生产力一致。
(4) 高效的高滴度AAV生产：在贴壁HEK细胞中使用MaxCyte STX进行三质粒共转染。
• 转染后48小时，几乎100%的转染细胞表现出强劲的转基因表达。
• 通过qPCR分析测量细胞沉淀中的高滴度AAV。
04. 结果与分析
(1) 大规模慢病毒生产：在贴壁HEK细胞中，使用MaxCyte STX进行四质粒共转染，每天收集培养基并测量转导单位，结果显示高效的生产能力。
(2) 悬浮细胞中的慢病毒生产：在悬浮适应的HEK 293FT细胞中，使用MaxCyte系统进行生产，3次生产运行均显示出高滴度，表明该技术在悬浮细胞中的可扩展性和一致性。
(3) 不同规模下的慢病毒生产一致性：通过静态和流式电穿孔在HEK细胞中生产慢病毒，结果显示无论规模大小，生产力一致。
(4) 高效的高滴度AAV生产：在贴壁HEK细胞中，使用MaxCyte STX进行三质粒共转染，结果显示几乎100%的转染细胞表现出强劲的转基因表达，并且通过qPCR分析测量到高滴度的AAV。
总体结论
MaxCyte的可扩展电穿孔技术允许对贴壁和悬浮适应细胞进行高效转染。该技术能够共转染多个质粒和大质粒，制造复杂的病毒载体。MaxCyte转染过程的一致性使得无论培养规模如何，生产产量都具有一致性。高效的悬浮细胞转染简化了使用MaxCyte过程进行病毒载体制造的可扩展性。通过MaxCyte电穿孔技术生成的高滴度AAV展示了该技术在制造应用中的多样性。
* 本文转载自「拓普百奥」微信公众号，作者：宇文数学（已获得作者授权）
>> 关于上海918博天堂：
上海918博天堂科学器材有限公司成立于2019年，总部位于上海，是一家实验室设备/耗材及分析仪器的专业服务商。公司致力于为生物、医药、物性检测、化工分析、食品、工业生产等相关领域客户提供国内外高科技专业设备以及技术咨询服务。